分光光度计的使用(分光度计调零100%和0%)
分光光度计的使用
分光光度计,又称光谱仪(spectrometer),是将成分复杂的光,分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780nm的可见光区和波长范围为200~380nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的380~780nm波长的光谱光通过
电源打开后,钨灯会亮起。若在波长200nm~290nm之间工作,则光源切换至氘灯;在波长290nm~360nm之间工作,则要同时点亮
光散射。这通常是由液体样品中的悬浮固体引起的,这可能会导致严重的测量误差。比色皿或样品中存在的气泡会散射光,导致无法重现结果。
测定时,禁止将试剂或液体物质放在仪器的表面上,如有溶液溢出或其它原因将样品槽弄脏,要尽可能及时清理干净。
1852年,Beer参考了Bouguer在1729年和Lambert在1760年所发表的文章,提出了分光光度的基本定律,即液层厚度相等时,颜色的强度与呈色溶液的浓度成比例,从而奠定了分光光度法的理论基础,这就是著名的朗伯·比尔定律。
分光度计调零100%和0%
1854年,Duboscq和Nessler等人将朗伯·比尔定律应用于定量分析化学领域,并且设计了第一台比色计。
检测器:是将光信号转变为电信号的装置,测量吸光度时,并非直接测量透过吸收池的光强度,而是将光强度转换为电流信号进行测试,这种光电转换器件称为检测器。
按START键开始测量,通常使用装有蒸馏水的吸收池调零后放入样品和参比样进行测试,并记录测试结果。测定前要经过预实验确定合适的样品浓度,让反应后的待测溶液的光吸收值位于0.3~0.7之间。否则,待测数据不能正确反映实际变化。如果不同样品之间浓度差异较大,则在测定时应先测定低浓度样品(浅色),再定测高浓度样品(深色)。
是提供符合要求的入射光的装置,有热辐射光源和气体放电光源两类。热辐射光源用于可见光区,一般为钨灯和卤钨灯,波长范围是350
吸收池:又称比色皿,供盛放试液进行吸光度测量之用,其底及两侧为毛玻璃,另两面为光学透光面,为减少光的反射损失,吸收池的光学面必须完全垂直于光束方向。根据材质可分为玻璃池和石英池两种,前者用于可见光光区测定,后者用于紫外光区。
吸光度仪器的使用
实验结束后将比色皿中的溶液倒尽,然后用蒸馏水或有机溶剂冲洗比色皿至干净,倒立晾干。关掉电源,再将干燥剂放入样品室内,并盖上防尘罩,做好使用登记。
比色皿内溶液以皿高的2/3~4/5为宜,不可过满以防液体溢出腐蚀仪器。测定时应保持比色皿清洁,池壁上液滴应用擦镜纸擦干,切勿用手捏透光面。测定紫外波长时,需选用石英比色皿。
测量完毕后取出吸收池,清洗并晾干后入盒保存。关闭电源,拔下电源插头,在样品室内放入干燥剂,盖上样品室盖,罩上防尘罩。
