dtt的作用(蛋白上样缓冲液含DTT有啥用)
dtt的作用
DTT,中文名为二硫苏糖醇。分子量为154、25,纯度大于百分之99。常用还原剂,有抗氧化作用,进口分装。DTT和巯基乙醇相比,作用相似,但DTT的刺激性气味要小,毒性也比巯基乙醇低。而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时,两者效果相近。
不过,二硫苏糖醇(DTT)往往无法还原包埋于蛋白质结构内部(溶剂不可及)的二硫键,这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性。
二硫苏糖醇(Dithiothreitol,简称为DTT),外观为白色粉末,CAS号:3483-12-3,是一种小分子有机还原剂,被广泛应用于细胞生物学、生物化学和生物医学应用领域。
二硫苏糖醇(DTT)是一种很强的还原剂,其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环(含二硫键)的构象稳定性。二硫苏糖醇对一个典型的二硫键的还原是由两步连续的巯基-二硫键交换反应所组成。二硫苏糖醇(DTT)的还原力受pH值的影响,只在pH值大于7的情况下能够发挥还原作用。这是因为只有脱去质子的硫醇盐负离子才具有反应活性,硫醇则没有,而巯基的pKa一般为8.3。
值得说明的是,二硫苏糖醇(DTT)是一种有毒的物质,例如过渡金属存在时,二硫苏糖醇(DTT)会引起生物分子的氧化损伤,同时二硫苏糖醇(DTT)还可强化一些含砷和汞的化合物**。二硫苏糖醇(DTT)有刺鼻臭味,可因吸入、皮肤接触而危害健康,因此操作时要做好防护,戴好口罩、手套及护目镜,并在通风柜内操作。
蛋白上样缓冲液含DTT有啥用
二硫苏糖醇(DTT)常用于还原蛋白分子和多肽的二硫键,通常作为蛋白质巯基保护剂,在**制剂中用于防止蛋白半胱氨酸残基形成分子内和分子间的二硫键。在核酸检测过程中二硫苏糖醇(DTT)可破坏RNase蛋白质中的二硫键,使RNA酶变性,有助于如RNA建库,RNA扩增等实验的进行。二硫苏糖醇(DTT)还用于保护细胞和组织解毒剂,辐射防护剂等等。
二硫键的断裂通常需要有大量的自由巯基和二硫键交换,三价膦系衍生物由于其较强的还原能力和对二硫键的选择还原性得到很多研究者的青睐。这类还原剂的还原是一个定量反应的过程,其原理是其中心原子“P”所带的孤电子对能与氧原子形成配位共价结合而具有还原性。如下式所示:
DTT(二硫代苏糖醇)和TCEP(三(2-羰基乙基)磷盐酸盐)可以相互代替,只是效果不同而已。与DTT相比,TECP还原能力更强,更具有选择性;无论在酸性还是碱性条件下都更加稳定;本身不带有电荷,不影响后续的实验。TCEP不仅是一种高效的二硫键还原剂,而且在某些巯基的交联反应中不需要除掉,因而在蛋白质化学及蛋白质组学研究常常优先选择TCEP。
DTT中文名称为二硫代苏糖醇,是苏糖醇的C-1及C-4位羟基置换成巯基的化合物,常常被用于蛋白质中二硫键的还原,可阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。
二硫键,又称S−S键,是2个巯基被氧化而形成的−S−S−形式的硫原子间的共价键,在蛋白质分子的立体结构形成上起着一定的重要作用。为了确定蛋白质的一级结构,首先必须将二硫键打开,使之成为线状多肽链。DTT和TCEP是常用的还原二硫键的试剂,那二者在使用中有什么不同呢?
dtt在蛋白提取中的作用
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末端脱氧核苷酸转移酶是一种无需模板的DNA聚合酶。临床发现,带有突出、凹陷或平滑末端的单双链DNA分子都可以作为末端脱氧核苷酸转移酶的底物,能够催化脱氧核苷酸结合到DNA分子的3'末端,并且不需要模板。末端脱氧核苷酸转移酶能够用于**性白血病诊断的*荧光测定,在*组织化学中,还可用于显示未成熟的T细胞、B细胞以及多能的造血干细胞存在。
由于其具有抗原,成熟的*样细胞通常会呈末端脱氧核苷酸转移酶阴性。而末端脱氧核苷酸转移酶阳性的细胞中一般会发现少量的健康*结,**细胞白血病的恶性细胞也会呈现末端脱氧核苷酸转移酶阳性,所以能够用于疾病的诊断以及鉴别,在临床有重要的作用。
推荐每4~6h复温1°C,12~24h内将温度(*温)恢复至36~37°C。复温过程中适当给予镇静、肌松*,预防肌颤导致的颅内压增高。
